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猪传染性胸膜肺炎(PCP) ELISA试剂盒   

货号 BFNE89997 类别 规格

产品概况

货号 BFNE89997
产品名称 猪传染性胸膜肺炎(PCP) ELISA试剂盒   
产品规格
敏感性 请咨询客服
检测范围 请咨询客服
灵敏度 请咨询客服
保存条件 试剂盒保存:2 - 8℃
有效期 6个月

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA)。往预先包被猪传染性胸膜肺炎(PCP) ELISA抗体的包被酶标板孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪传染性胸膜肺炎(PCP) ELISA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。


试剂盒组成

名称 96孔配置 48孔配置 备注
微孔酶标板 12 孔 × 8 条 12 孔 × 4 条
标准品 0.3 mL × 6 管 0.3 mL × 6 管
样本稀释液 6 mL 3 mL
检测抗体-HRP 10 mL 5 mL
20×洗涤缓冲液 25 mL 15 mL 按说明书进行稀释
底物 A 6 mL 3 mL
底物 B 6 mL 3 mL
终止液 6 mL 3 mL
封板膜 2张 2张
说明书 1份 1份
自封袋 1个 1个

:使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致


试剂盒性能

  1. 样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
  2. 批内变异系数与批间变异系数应小于10%。

需自备的试剂盒器材

  1. 标准规格酶标仪
  2. 37℃恒温箱
  3. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
  4. 去离子水,用来稀释洗涤缓冲液

样品收集、处理方法

  1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,室温血液自然凝固10 - 20分钟,2000 - 3000 rpm离心20分钟,将血清和红细胞迅速小心地分离,收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  2. 血浆:根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂。混合10 - 20分钟后,2000 - 3000 rpm离心20分钟。收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  3. 细胞上清液:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。 2000 - 3000 rpm离心20分钟,收集上清。
  4. 组织匀浆:标本采集后用液氮迅速冷冻保存备用。使用时取适量标本,加入一定量的 PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分后,2000 - 3000 rpm离心20分钟,收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

样品保存

如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。


实验步骤

  1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需酶标板孔数目,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2. 标准品和样本加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL。样本孔先加待测样本 10 μL,再加样本稀释液 40 μL,空白孔不加。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3. 加酶:标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100 μL,用封板膜封住反应孔。
  4. 温育:37 ℃水浴锅或恒温箱温育 60分钟。
  5. 配液:将20X浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍后备用。
  6. 洗涤:小心揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板)。
    [洗板方法]
    手工洗板:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,酶标板倒扣在吸水纸上拍干,反复5次。
    自动洗板:每孔注入洗液350 μL,浸泡1分钟,洗板5次。
  7. 显色:每孔加入底物 A、B 各 50 μL,轻轻震荡混匀后,37 ℃ 避光孵育 15min。
  8. 终止:每孔加入终止液 50μL,终止反应,此时蓝色立刻转为黄色。
  9. 测定:以空白孔调零,15分钟内在450 nm 波长处测定各孔的吸光度(OD 值)。

结果计算

绘制标准曲线:在 Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度。或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。


注意事项

  1. 试剂盒保存在 2 – 8 ℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,属于正常现象,可水浴加热使结晶完全溶解后再使用。初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
  2. 要严格避免操作过程中酶标板干燥,干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。
  3. 禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。
  4. 本公司提供的96孔酶标板是单条可拆型酶标板,用户可按需求使用;剩余的酶标板请放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
  5. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。